包膜氯化膽堿在人工體外模擬奶牛瘤胃、皺胃、小腸中溶出、釋放、吸收的效果評價

氯化膽堿屬于維生素類，其主要生理功能具有維持細胞結構完整性,保證細胞膜通透性和生物信號傳導等方面發揮關鍵作用。

 

膽堿也是構成磷脂的重要成分,參與骨骼和軟骨基質的成熟過程；參與動物體內脂肪代謝，脂肪在肝臟被降解成脂肪酸和甘油,膽堿可以將脂肪酸與卵磷脂結合后轉運出肝臟,避免脂肪在肝臟的大量沉積，可緩解脂肪肝的形成。

膽堿作為甲基供體參與蛋氨酸的合成，因而可節省體內蛋氨酸中甲基團的消耗，并在形成醋酸脂乙酸膽堿的情況下參與傳導神經沖動。

 

 

在奶牛特殊的的圍產期間，奶牛需要更多的膽堿來幫助肝臟處理多余的脂肪，讓甘油三酯能順利轉移出肝臟。

其意義在于減少肝臟脂肪的沉積和酮體的生成，能有效減少脂肪酸和酮體對組織和器官的損傷，使奶牛從泌乳期的開端到更高的峰值產奶量階段有一個平穩的過渡，緩解機體糖-脂代謝紊亂，減少多種代謝性疾病的發生，如脂肪肝、酮病、繼發性疾病等，間接提高奶牛壽命和牧場經濟效益。

 

 

目前市場上出售的氯化膽堿產品劑型主要有液體狀、粉狀和包膜狀。現主要針對包膜氯化膽堿在奶牛圍產期中的應用效果，設計包膜氯化膽堿人工體外模擬奶牛瘤胃、皺胃、小腸中的溶出、釋放、吸收分布情況的試驗。

 

1.試驗方案：取市售粉狀50%氯化膽堿（20210612）和50%包膜氯化膽堿（耀飛公司自產，20210628），分別進行人工體外模擬奶牛瘤胃溶出度、皺胃釋放率、小腸中的吸收分布情況。

 

2.試驗材料：50%氯化膽堿（硅型）、50%包膜氯化膽堿（奧特堿）、碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、氯化鉀、稀鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液、甲基紅一亞甲基藍混合指示液、雷氏鹽甲醇溶液、磷酸氫二鉀、蛋白酶、胰脂肪酶、淀粉酶、玻璃砂芯坩堝、分析天平、電熱干燥箱、SHZ-82水浴恒溫振蕩器、超聲清洗器、電爐、真空泵、燒杯、滴定管、純化水等一般試驗室試劑和儀器。

甲基紅一次甲基藍混合指示液

 

3.試驗方法

3.1 瘤胃溶出率：準確稱取對照組粉劑氯化膽堿和試驗組包膜氯化膽堿各9份，每份2.5g，分別浸入50ml人工瘤胃液中（McDougall緩沖液），McDougall緩沖液：將7.43克碳酸氫鈉、7.00克磷酸二鈉12水合物、0.34克氯化鈉、0.43克氯化鉀、0.10克氯化鎂6水合物和0.05克氯化鈣溶解在1000毫升水。于39℃恒溫并搖晃2、4、6、8、10、12、16、20、24小時，分別分離過濾，測定濾液中膽堿含量與總量的比率。（過瘤胃保護率=100%-溶出率）

 

3.2 皺胃釋放率：準確稱取對照組粉劑氯化膽堿和試驗組包膜氯化膽堿各5份，每份2.5g，分別浸入50ml皺胃液相對的Clark-Lubs緩沖液中，Clark-Lubs緩沖液：將3.73克氯化鉀和2.1毫升鹽酸溶解在1000毫升水中而制成的溶液。然后于39℃恒溫搖晃2、4、6、8、10小時，分別分離過濾，測定濾液中膽堿含量與總量的比例。
 

3.3 小腸釋吸收率：準確稱取包膜膽堿5份各2.5g分別浸入小腸液相對的人工腸液（ph6.8）中，人工腸液：將6.8g磷酸氫二鉀溶解于500ml水中，加入0.25g胰蛋白酶、9.375g胰脂肪酶、83.3mg胰淀粉酶，并定容至1000ml，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調節ph為6.8。然后于39℃恒溫搖晃2、4、6、8、10小時后，分別過濾，測定濾液中膽堿含量與總量的比例。

 

3.4 氯化膽堿含量測定方法：精密量取續濾液10ml，置100ml高型燒杯中，加3ml氫氧化鈉溶液，蓋上表面皿，在電爐上加熱微沸5 min，冷卻，用水沖洗表面皿及燒杯壁。加1滴甲基紅一亞甲基藍混合指示液，用鹽酸溶液調至紫紅色(pH5-pH6)，于冰水浴中冷卻至5℃以下，繼續保持在冰水浴中，在攪拌下，緩慢滴加15 ml雷氏鹽甲醇溶液，繼續攪拌反應30 min，再靜置陳化30 min。將沉淀轉移到預先已于(105士2)℃下干燥至質量恒定的玻璃砂芯坩堝中，減壓抽濾、用水洗滌沉淀3~4次，每次用水約10ml。將裝有沉淀的玻璃砂芯坩堝移人(105士2)℃電熱千燥箱內，干燥2h，取出。于干燥器內冷卻至室溫，稱量。在測定的同時，按測定相同的步驟，對不加實驗室樣品而使用相同數量的試劑溶液做空白試驗。結果計算：

 

W1-W0

X%=—————×5×0.33045×100

M×N

式中：
W１--- 沉淀質量的數值，單位為克(g);
W0--- 空白試驗沉淀質量的數值，單位為克(g);

M--- 試料質量的數值，單位為克(g);

0.33045---氯化膽堿摩爾質量與雷氏鹽-氯化膽堿沉淀產物摩爾質量的比值

5--試料的稀釋倍數
N---包膜氯化膽堿的標示含量

 

4.試驗結果及評價：

根據檢測結果，普通氯化膽堿在瘤胃液中已完全溶出，活性成分已降解，不能到皺胃、小腸部位。而經過嵌入式包被工藝的包膜氯化膽堿(奧特堿），在本試驗條件下的過瘤胃保護率大于90%、皺胃液中釋放率小于10%，在小腸部位的吸收率大于97%。從而確保足量膽堿的活性成分在腸道中充分吸收利用。

 

5.試驗小結：包膜氯化膽堿，可以減少脂肪肝，降低奶牛酮病的發生。促進NEFT的完全氧化，抑制酮體生成；降低血液中的β-羥基丁酸含量，從而減少甘油三酯沉積和脂肪肝，減少奶牛酮病發生。可以提高奶牛產奶品質，延長產奶高峰，促進NEFT轉化為ATP，發揮產能作用，抑制能量負平衡的影響，增加泌乳能力。還可以提高乳脂、乳蛋白，減少蛋氨酸轉化為膽堿的消耗，從而更多用于乳蛋白的合成。


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